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鴨瘟病毒檢測試劑盒(實時熒光PCR法)

產(chǎn)品型號:

廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

訪問量:1124

更新時間:2022-09-27

簡要描述:

?鴨瘟病毒檢測試劑盒(實時熒光PCR法)引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。

詳細說明:

鴨瘟病毒檢測試劑盒(實時熒光PCR法)

準備物品:

清理液(A)                                   毫升

染色液(t B)                                   微升

鴨瘟病毒檢測試劑盒(實時熒光PCR法)說明書稀釋液(C)                                   毫升

溶解液(tD)                                   毫升

產(chǎn)品說明書                                   1份

注意事項:

1.基礎程序;

2.擴增溫度和延伸溫度;

3.反應時間;

4.循環(huán)次數(shù);

5.PCR 反應液的配制;

6.鴨瘟病毒檢測試劑盒(實時熒光PCR法)PCR技術(shù)的基本原理;

7.PCR的反應動力學;

8.PCR擴增產(chǎn)物;

9.PCR反應體系與反應條件。

反應五要素:

參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

鴨瘟病毒檢測試劑盒(實時熒光PCR法)引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:

①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子*很有好處。

⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。






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